小鼠ELISA试剂盒具有高效、快捷、易批量操作等优点,不同的厂家提供不同种类,不同类型的Elisa试剂盒产品,为科研用户带来极大的方便。小鼠ELISA试剂盒能够针对特定检测源,制备特异性抗原抗体,根据应用需要量身定制检测试剂盒,有效控制检测试剂成本。
小鼠ELISA试剂盒的实验原理:
将目标抗体包被于96孔微孔板中,制成固相载体,向微孔中分别加入标准品或标本,其中的目标连接于固相载体上的抗体结合,然后加入微生物化的目标抗体,将未结合的生物素抗体洗净后,加入HRP标记和亲和素,再次*洗涤后加入TMB底物显色。TMB在过氧化物酶的催化下转化成蓝色,并在酸的作用下转化成最终的黄色。颜色的深浅和样品中的目标呈正相关。用酶标仪在450nm波长下测定吸光度(O.D.值),计算样品浓度。
实验前的准备工作:
1、准备好所有实验额外所需物品,如试管 吸头 移液器 离心机等。
2、确定试剂盒在有效期内。
3、仔细阅读说明书。
4、按说明书确定所有试剂齐全(数量 体积)。
5、标本制备要规范,每份标本体积要按2-3个复孔以上的量制备(贮存),尽量分装做备份。
6、根据检测标本数量确定所需试剂的量。
7、按说明书将所用试剂盒平衡至室温,配制所需试剂。
小鼠ELISA试剂盒的操作步骤:
1、使用前,将所有试剂充分混匀。不要使液体产生大量的泡沫,以免加样时加入大量的气泡,产生加样上的误差。
2、根据待测样品数量加上标准品的数量决定所需的板条数。每个标准品和空白孔建议做复孔。每个样品根据自己的数量来定,能使用复孔的尽量做复孔。标本用标本稀释液1:1稀释后加入50ul于反应孔内。
3、加入稀释好后的标准品50ul于反应孔、加入待测样品50ul于反应孔内。立即加入50ul的生物素标记的抗体。盖上膜板,轻轻振荡混匀,37℃温育1小时。
4、甩去孔内液体,每孔加满洗涤液,振荡30秒,甩去洗涤液,用吸水纸拍干。重复此操作3次。如果用洗板机洗涤,洗涤次数增加一次。
5、每孔加入80ul的亲和链酶素-HRP,轻轻振荡混匀,37℃温育30分钟。
6、甩去孔内液体,每孔加满洗涤液,振荡30秒,甩去洗涤液,用吸水纸拍干。重复此操作3次。如果用洗板机洗涤,洗涤次数增加一次。
7、每孔加入底物A、B各50ul,轻轻振荡混匀,37℃温育10分钟。避免光照。
8、取出酶标板,迅速加入50ul终止液,加入终止液后应立即测定结果。
9、在450nm波长处测定各孔的OD值。