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人降钙素(CT)elisa试剂盒是怎么操作的?又该注意哪些事项?

更新时间:2023-01-28      浏览次数:481
  人降钙素(CT)elisa试剂盒免疫测定依其测定结果的表达方式,可分为定性和定量两类。定性测定常以“有”或“无”也即“阳性”或“阴性”来表达测定结果;定量测定的结果则以浓度的方式表达。
 
  定性测定结果确定的依据在于阳性/阴性判定值(cut-off)的建立,cut-off值的确立应尽可能地避免假阳性或假阴性结果的出现。除了cut-off值以外,还有许多其他的设值方法以判断阴性和阳性结果,如S/N(常称为P/N)比值(ratio)等。
 
  定量测定的依据是使用系列浓度标准品测得的剂量反应曲线(即通常所谓的标准曲线)。由于定量免疫测定中的剂量反应曲线与生化测定中的标准曲线相比,一般均为非线性的,变异较大,故不宜称为标准曲线。
 
  人降钙素(CT)elisa试剂盒的操作流程:
  1、从室温平衡20min后的铝箔袋中取出所需板条,剩余板条用自封袋密封放回4℃。
  2、设置标准品孔和样本孔,标准品孔各加不同浓度的标准品50μL;
  3、样本孔中加入待测样本50μL;空白孔不加。
  4、除空白孔外,标准品孔和样本孔中每孔加入辣根过氧化物酶(HRP)标记的检测抗体100μL,用封板膜封住反应孔,37℃水浴锅或恒温箱温育60min。
  5、弃去液体,吸水纸上拍干,每孔加满洗涤液(350μL),静置1min,甩去洗涤液,吸水纸上拍干,如此重复洗板5次(也可用洗板机洗板)。
  6、每孔加入底物A、B各50μL,37℃避光孵育15min。
  7、每孔加入终止液50μL,15min内,在450nm波长处测定各孔的OD值。
  
  注意事项:
  1、严格按照规定的时间和温度进行温育以保证准确结果。所有试剂都必须在使用前达到室温20-25℃。使用后立即冷藏保存试剂;
  2、洗板不正确可以导致不准确的结果。在加入底物前确保尽量吸干孔内液体。温育过程中不要让微孔干燥掉;
  3、消除板底残留的液体和手指印,否则影响OD值;
  4、底物显色液应呈无色或很浅的颜色,已经变蓝的底物液不能使用;
  5、封板膜只限一次性使用,避免试剂和标本的交叉污染以免造成错误结果;
  6、在储存和温育时避免强光直接照射。底物请避光保存;
  7、平衡至室温后再打开密封袋以防水滴凝聚在冷板条上。
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