解析！血清elisa试剂盒的操作流程

更新时间：2022-12-23

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　　血清elisa试剂盒是基于经典的双抗夹心ELISA方法，利用HRP偶联的抗体，催化TMB产生颜色物质，基于标准曲线，计算出样品中人抵抗素的含量。

　　试剂盒特点有：

　　1、高效、灵敏、特异的抗体；

　　2、稳定的重复性和可靠性；

　　3、吸附性能好，空白值低，孔底透明度高的固相载体；

　　4、适用血清、血浆、组织匀浆液、细胞培养上清液、尿液等等多种标本类型；

　　5、节省实验经费。

　　血清elisa试剂盒的操作流程如下：

　　1、血清总补体ELISA试剂盒待测样品孔中每孔加入待测样品100μl，每种样品设3个平行孔；设两个阴性对照孔，每孔加未处理组的细胞裂解液100μl；另设一个空白对照孔，加入纯细胞裂解液100μl。

　　2、酶标板置4℃，包被过夜。

　　3、洗板：吸干孔内反应液，产品仅用于科研用洗涤液过洗一遍，之后将洗涤液注满板孔，浸泡1-2分钟，间歇摇动。甩去孔内液体后在吸水纸上拍干。重复洗涤3-4次。

　　4、阴性对照孔每孔加入PBS 50μl，样品孔及空白孔每孔加入1:500稀释的兔抗人AIF抗体工作液50μl。

　　5、酶标板置37℃培养箱的湿盒内，孵育60min。

　　6、洗板，同(4)。

　　7、每孔加1:5000稀释的HRP-标记的山羊抗兔抗体工作液 100μl。

　　8、酶标板置37℃培养箱的湿盒内，孵育60min。

　　9、洗板，同(4)。

　　10、每孔加TMB显色液 100μl，轻轻混匀10s，置37℃暗处反应15-20min。

　　11、每孔加100μl 2mol/L H2SO4终止反应。

　　12、分别测450nm吸光值W1和630nm吸光值W2，最终测得的OD值为两者之差(W1-W2)，以减少由容器上的划痕或指印等造成的光干扰。

　　13、数据处理：在得出标本(S)和阴性对照(N)的 OD值后，计算S/N值。S/N≥2.1为阳性判定标准。

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